การตรวจสอบความสามารถในการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบชนิดซี ในเซลล์ตับเพาะเลี้ยงและประเมินค่าการเพิ่มจานวนของไวรัสด้วยวิธีพีซีอาร์ |
| โดย: นางสาวฐานิดา สุธีรยงประเสริฐ,นางสาวศุภิสรา อิทธสมบัติ ปีการศึกษา: 2558 กลุ่มที่: 7 อาจารย์ที่ปรึกษา: คณิสส์ เสงี่ยมสุนทร , มนตรี ยะสาวงษ์ , กฤษณ์ ถิรพันธุ์เมธี ภาควิชา: ภาควิชาชีวเคมี Keyword: HepaRG, Hepatocyte like cell, PCR, HBV, hepatitis C virus, HepaRG, Hepatocyte like cell, PCR, HBV, hepatitis C virus |
| บทคัดย่อ: ไวรัสตับอักเสบชนิดซีเป็นสาเหตุที่ก่อให้เกิดโรคตับเรื้อรังและสามารถพัฒนาเป็นโรคมะเร็งตับ การพัฒนาแบบจาลองในการศึกษาวงชีวิตของไวรัสในเซลล์ตับถูกพัฒนาขึ้นโดยวิธีการใช้เซลล์ตับ (Huh-7) และสารพันธุกรรมของไวรัสตับอักเสบชนิดซี (JFH-1) เพื่อสร้างไวรัสในเซลล์เพาะเลี้ยง อย่างไรก็ตามเซลล์เจ้าบ้านที่ใช้ผลิตไวรัสตับอักเสบชนิดซีเป็นเซลล์ที่พัฒนามาจากเซลล์มะเร็งซึ่งมีความแตกต่างจากเซลล์ตับปกติ เพื่อพัฒนาเซลล์ตับปกติเป็นแบบจาลองในการเพิ่มจานวนไวรัสตับอักเสบชนิดซี เริ่มจากการส่งผ่านสารพันธุกรรมของไวรัสเข้าสู่เซลล์คล้ายเซลล์ตับ (HLCs) และเซลล์มะเร็งตับ (HepaRG) เปรียบเทียบปริมาณของไวรัสที่ผลิตขึ้นในอาหารเลี้ยงเซลล์ทั้งสองชนิด นาไวรัสที่ได้ไปทดสอบการติดเชื้อในเซลล์ที่ปลอดเชื้อและหาปริมาณไวรัสที่ผลิตจากเซลล์ที่ติดเชื้อ ผลศึกษาเปรียบเทียบความสามารถในการผลิตไวรัสตับอักเสบชนิดซี ในเซลล์เพาะเลี้ยง 2 ชนิด คือ hepatocyte-like cell (HLC) และ HepaRG โดยเปรียบเทียบปริมาณไวรัสด้วยวิธี absolute quantitative real-time PCR และนาจานวนรอบของการทาพีซีอาร์เปรียบเทียบกับกราฟ HCV RNA มาตรฐานพบว่าปริมาณไวรัสตับอักเสบชนิดซีที่ผลิตได้จากเซลล์ HLC และ HepaRG เท่ากับ 15x106 IU/mL และ 3x106 IU/ mL ผลการติดเชื้อในเซลล์ทั้ง 2 ชนิด พบว่าปริมาณไวรัสตับอักเสบชนิดซีที่ผลิตได้จากเซลล์ HLC และ HepaRG เท่ากับ 18x108 IU/mL และ 9x108 IU/mL โดยเซลล์ HLC ที่ผ่านการ transfect HCV RNA และ infect ด้วยอนุภาค HCV สามารถผลิตไวรัสได้มากกว่าเซลล์ HepaRG 84.09% และ 66.79% ตามลาดับ การทดสอบ HCV RNA ชนิดสายลบด้วยวิธีเจลอิเลคโตรโฟรีซิสจากพีซีอาร์ยืนยันได้ว่าเซลล์ HLC สามารถใช้เป็นเซลล์เจ้าบ้านสาหรับผลิตไวรัสตับอักเสบชนิดซีเพื่อใช้เป็นเซลล์ทดสอบยาต้านไวรัสในลาดับถัดไป |
| abstract: Hepatitis C virus is a major human pathogen causing chronic liver diseases and developing to hepatocellular carcinoma. The efficient cell culture model for HCV life cycle was developed using Huh-7 cell line and full-length HCV RNA (JFH-1) to propagate HCV in cell culture. However, the host cell for HCV production is depend on hepatocellular carcinoma cell lines that were different from normal human hepatocyte. To develop normal human hepatocyte as a host cell for HCV production, HCV RNA (JFH-1) was transfected into HLC and HepaRG cells and the viral load was compared in the term of HCV propagation from transfection. HCV particles from culture medium were used to infect naïve HLC and HepaRG. The HCV viral load in hepatocyte-like cell (HLC) and HepaRG were evaluated using absolute quantitative real-time PCR technique by comparing the PCR threshold cycles with standard curve from HCV RNA. The result demonstrated that HCV viral load from transfected HLC and HepaRG were 15x106 IU/mL and 3x106 IU/mL. The viral load from infected HLC and HepaRG were were 18x108 IU/mL and 9x108 IU/mL. Transfected-HLC and infected-HLC produced HCV particles 84.09% and 66.79% higher than HepaRG. The detection of positive stranded HCV RNA in infected cell and HCV viral load confirmed that HLC could serve as a host cell for HCV production and screening anti-HCV drugs in the future. |
| . |